植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置:植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室與其他實(shí)驗(yàn)室的主要區(qū)別是要求無(wú)菌操作,避免微生物及其他有害因素的影響。植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的面積大小和裝備取決于兩個(gè)因素:一是實(shí)驗(yàn)性質(zhì)和研究?jī)?nèi)容,二是能承受的經(jīng)費(fèi)能力。然而,一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室必須具備下列條件:
①清洗和儲(chǔ)存玻璃器皿、塑料器皿和其他實(shí)驗(yàn)器皿;
②培養(yǎng)基的配制、滅菌和儲(chǔ)存;
③植物材料的無(wú)菌操作;
④可控溫度、光照、濕度等條件,以便對(duì)材料進(jìn)行體外培養(yǎng);
⑤培養(yǎng)物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程的顯微觀察。因此,植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室至少需要有三間相連但相互隔開(kāi)的房間:第一間用于玻璃器皿的清洗和儲(chǔ)存,以及培養(yǎng)基的制備(稱(chēng)為培養(yǎng)基室);第二間用于無(wú)菌操作(稱(chēng)為接種室);第三間用于放置培養(yǎng)物(稱(chēng)為培養(yǎng)室)。此外,如果條件許可,應(yīng)配備能進(jìn)行組織和細(xì)胞生長(zhǎng)顯微觀察的細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室。
(一)培養(yǎng)基室
培養(yǎng)基室的清洗區(qū)應(yīng)備有各種類(lèi)型的毛刷、大水槽和冷熱水源。此外,還應(yīng)備有塑料桶,用以浸泡需要清洗的實(shí)驗(yàn)室器皿;鼓風(fēng)干燥箱,用以干燥清洗后的器皿;防塵廚,用以?xún)?chǔ)存干凈的器皿。條件允許的話,清洗區(qū)應(yīng)單獨(dú)設(shè)一個(gè)房間。如果培養(yǎng)基的制備和器皿的清洗在同一個(gè)房間內(nèi)進(jìn)行,應(yīng)特別注意不要使清洗干擾培養(yǎng)基的制備,嚴(yán)格防止肥皂水等濺入培養(yǎng)基內(nèi)??梢栽谇逑磪^(qū)與培養(yǎng)基制備區(qū)之間臨時(shí)加一塊擋板,或把清洗時(shí)間和配制培養(yǎng)基時(shí)間錯(cuò)開(kāi)。
配制培養(yǎng)基所需的一般設(shè)備包括以下幾種。
①工作臺(tái):工作臺(tái)的高度應(yīng)適合于操作人員工作,要求表面平整、耐高溫、放置水平。
②低溫冰箱:用以?xún)?chǔ)存長(zhǎng)期保存的藥品。
③普通冰箱:用以?xún)?chǔ)存各種化學(xué)藥品、植物材料和短期儲(chǔ)存儲(chǔ)備液及母液等。
④大塑料瓶:用以?xún)?chǔ)存蒸餾水。
⑤天平:用于稱(chēng)量。
⑥電熱磁力攪拌器:用以溶解化學(xué)藥品。
⑦電爐:用于加熱溶化瓊脂和手提式高壓滅菌鍋的加熱。
⑧酸度計(jì)或pH試紙。
⑨抽氣機(jī)或真空泵:用以輔助過(guò)濾滅菌。
⑩恒溫水浴:用于融化瓊脂。
?高壓滅菌鍋:用以進(jìn)行培養(yǎng)基滅菌。
?其他用具。
(二)接種室
接種室也稱(chēng)為無(wú)菌操作室,好能與外界隔離,不能穿行或不受其他干擾。接種室分更衣間、緩沖間及操作間三部分。更衣間供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩之用。緩沖間位于更衣間與操作間之間,目的是為了保證操作間的無(wú)菌環(huán)境,同時(shí)可放置恒溫箱及某些小型儀器。操作間則用于無(wú)菌操作,其大小要適當(dāng),且其頂部不宜過(guò)高以保證紫外線的滅菌效果,墻壁光滑無(wú)死角以便清洗和消毒。接種室為密閉式,用紫外線滅菌燈進(jìn)行空氣消毒。有些實(shí)驗(yàn)室使用電子消毒滅菌器,它在高壓電場(chǎng)作用下,電子管的內(nèi)外電極發(fā)生強(qiáng)烈電子轟擊,使空氣電離而將空氣中的氧轉(zhuǎn)換成臭氧。臭氧是一種強(qiáng)氧化劑,能與細(xì)菌的胞膜及酶蛋白進(jìn)行氧化分解反應(yīng),因此靠臭氧氣體彌漫性擴(kuò)散達(dá)到殺菌的目的,使消毒時(shí)沒(méi)有死角。消毒后空間內(nèi)的殘留臭氧只需30~40min即能自行還原成氧氣,對(duì)空間不留異味、消毒物體表面不留殘毒。
接種室的主要儀器設(shè)備是超凈工作臺(tái)。超凈工作臺(tái)可直接購(gòu)買(mǎi),安裝方便,占用空間小且凈化效果很好,為植物組織培養(yǎng)工作提供了良好的無(wú)菌操作環(huán)境。
(三)培養(yǎng)室
培養(yǎng)室的溫度必須是可控的,一般是用空調(diào)或熱風(fēng)機(jī)使溫度保持在(25±12)℃。若要求更高或更低的溫度,可使用裝有熒光燈的培養(yǎng)箱。培養(yǎng)箱可安裝在培養(yǎng)室之外任何方便和安全的地方。
植物組織培養(yǎng)要求一定的光照,采用日光燈源,一般光照強(qiáng)度為1000~30001x。但有些實(shí)驗(yàn)需要在散射光下進(jìn)行,有些則要求完全黑暗條件。因此,在設(shè)備上對(duì)此應(yīng)有所準(zhǔn)備。光源可由自動(dòng)定時(shí)開(kāi)關(guān)控制。暗培養(yǎng)一般是在特制的木櫥內(nèi)進(jìn)行或加蓋黑布。
培養(yǎng)室的濕度應(yīng)控制在相對(duì)濕度80%左右,當(dāng)培養(yǎng)室的相對(duì)濕度降低到50%以下時(shí),應(yīng)采取措施增加濕度,以免培養(yǎng)基變干。如果濕度太高則應(yīng)除濕,以免培養(yǎng)瓶蓋塞發(fā)潮,增加污染的機(jī)會(huì)。
在培養(yǎng)室內(nèi)應(yīng)設(shè)有若干培養(yǎng)架以放置培養(yǎng)物。培養(yǎng)架大小一般為1200mm×600mm×400mm,層數(shù)根據(jù)培養(yǎng)室的空間高度而定,每層培養(yǎng)架裝上玻璃板。但玻璃板下面的日光燈在工作時(shí)易使玻璃發(fā)熱,使放置其上的培養(yǎng)瓶及培養(yǎng)基的溫度增加,影響培養(yǎng)效果。安裝剛硬的鐵絲網(wǎng)或細(xì)鋼管,在其上放篩孔塑料盤(pán),以便空氣流動(dòng)和穩(wěn)定溫度,同時(shí)也可使頂層的燈光能透射到下層的培養(yǎng)物上。培養(yǎng)架可以木制也可以鋼制,每層分別裝有日光燈管。燈管和上一層架子之間裝有隔熱層,以免上層培養(yǎng)物的底部受熱。
三角瓶、玻璃罐或培養(yǎng)皿都可直接置于培養(yǎng)架上,或先置于大小合適的盤(pán)子上。再將盤(pán)子置于培養(yǎng)架上。所用的容器若為試管,就需要有試管架。試管架可用鐵絲制作,每個(gè)試管架能裝25個(gè)或50個(gè)試管。培養(yǎng)容器必須粘上標(biāo)簽或用記號(hào)筆標(biāo)注,注明詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)(植物名稱(chēng)、外植體、培養(yǎng)基、培養(yǎng)時(shí)間等)。
培養(yǎng)室內(nèi)應(yīng)設(shè)有搖床,以便進(jìn)行液體懸浮培養(yǎng)。搖床可以是平動(dòng)式的,也可以是旋轉(zhuǎn)式的。應(yīng)選購(gòu)溫光可控式搖床。
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