PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)的簡稱。是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。其特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加,是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法,PCR實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域。
PCR實(shí)驗(yàn)室主要實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目:
艾滋病檢測(cè),乙型肝炎,禽疫病,癌基因的檢測(cè)和診斷,DNA指紋,個(gè)體識(shí)別,親子鑒定及法醫(yī)物證等等。
PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)
一、PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局
PCR實(shí)驗(yàn)室原則上分為4個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域,由擴(kuò)增前區(qū)到擴(kuò)增后區(qū),且要嚴(yán)格分開。實(shí)驗(yàn)材料、試劑、記錄筆、紙、清潔材料等,只能從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū),即從試劑制備區(qū)–樣品制備區(qū)—擴(kuò)增區(qū)—擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū),不得逆向流動(dòng)。實(shí)驗(yàn)室的氣流也應(yīng)從擴(kuò)增前區(qū)流動(dòng)到擴(kuò)增后區(qū),不得逆向流動(dòng)。
各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)置緩沖間,工作間與緩沖間之間宜安裝聯(lián)鎖裝置。不同功能的核酸檢驗(yàn)工作區(qū)應(yīng)是分隔獨(dú)立的工作室,并有明顯的標(biāo)志,各區(qū)間不能直通。各區(qū)之間如果是緊密相連,需安裝物品 傳遞窗。每個(gè)工作區(qū)域的頂部應(yīng)安裝紫外燈,紫外燈的波長為254nm。
實(shí)驗(yàn)室較為理想的布局模式為有一個(gè)專用走廊,試劑制備區(qū),樣品制備區(qū),擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)很規(guī)范的排列在一起。內(nèi)實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)為正壓或常壓狀態(tài),緩沖間內(nèi)設(shè)為負(fù)壓狀態(tài),使這三個(gè)區(qū)的空氣流向由實(shí)驗(yàn)區(qū)域內(nèi)向外,緩沖間內(nèi)通向內(nèi)實(shí)驗(yàn)室和走廊的門可安一種聯(lián)鎖裝置,當(dāng)一個(gè)門打開時(shí),另一門必須關(guān)閉狀態(tài),防止出現(xiàn)兩個(gè)門同時(shí)打開的情況。
二、各區(qū)的功能及主要設(shè)備
試劑制備區(qū)主要是擴(kuò)增試劑的配制,分裝盒保存。主要設(shè)備有天平、冰箱、離心機(jī)、加樣器、紫外燈。
樣品制備區(qū)主要是樣品的混樣和測(cè)試樣品的制備。主要設(shè)備有冰箱、生物安全柜、離心機(jī)、加樣器、振蕩器、恒溫水浴、上下水設(shè)備、廢棄物容器、紫外燈。根據(jù)制備樣品的性質(zhì)和要求決定操作臺(tái)是用生物安全柜、凈化工作臺(tái)、還是排毒柜,如疾控中心、臨床醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室一般選用生物安全柜,植物轉(zhuǎn)基因、檢疫等可選排毒柜。
擴(kuò)增區(qū)是pcr擴(kuò)增反應(yīng)體系的配制和模板的加入,核酸擴(kuò)增。加樣應(yīng)在生物安全柜(超凈工作臺(tái))內(nèi)進(jìn)行,超凈工作臺(tái)的氣流方向宜選擇垂直式。核酸擴(kuò)增設(shè)備為冰箱、生物安全柜、離心機(jī)加樣器、廢棄物容器、紫外燈。
擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)是擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)定。若實(shí)驗(yàn)僅采用全自動(dòng)擴(kuò)增檢測(cè)儀,可將 區(qū)與擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)合并為一個(gè)區(qū)。本區(qū)所使用的儀器設(shè)備有酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、加樣器和水浴箱等。
三、實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)及壓力控制
各個(gè)區(qū)域之間應(yīng)具備單向的實(shí)驗(yàn)工藝流、物流、人流與氣流,形成單向流程的保護(hù)屏障,避免實(shí)驗(yàn)室之間的相互干擾,防止核酸氣溶膠對(duì)實(shí)驗(yàn)過程造成污染產(chǎn)生假性結(jié)果。PCR實(shí)驗(yàn)室并沒有嚴(yán)格的凈化要求,但是為了避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉污染的可能性,宜采用全送排的氣流組織形式。
四、PCR實(shí)驗(yàn)室裝修
實(shí)驗(yàn)室的墻體,包括頂棚,應(yīng)結(jié)構(gòu)牢固、氣密性好;所有陰角宜采用弧形線條過濾;
墻體內(nèi)壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒;
地面材料應(yīng)滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。地面建議使用PVC卷材地面或自流平地面,整體性好,便于進(jìn)行清掃,耐腐蝕。
pcr實(shí)驗(yàn)室建設(shè)中容易出現(xiàn)的問題:
1、PCR實(shí)驗(yàn)室的空氣流向必須嚴(yán)格按照試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)空氣壓力逐漸遞減方式進(jìn)行,防止擴(kuò)增產(chǎn)物順空氣氣流進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域。需要嚴(yán)格的通風(fēng)設(shè)計(jì),若通風(fēng)設(shè)計(jì)不合理,會(huì)使風(fēng)速流向混亂,甚至危害人們健康。
2、人流路徑與物流路徑設(shè)計(jì)不合理
進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室區(qū)域工作人員應(yīng)該按照以下路徑:
公共清潔區(qū)——更衣間(更換潔凈服)——緩沖間——污染實(shí)驗(yàn)區(qū)
工作人員退出實(shí)驗(yàn)室的路徑為:
污染試驗(yàn)區(qū)——緩沖間——淋浴間(有條件的可設(shè)置)——更衣間——公共清潔區(qū)
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